熒光定量服務(wù)都有哪些內(nèi)容和要求?
點擊次數(shù):2189 更新時間:2020-09-24
在PCR擴(kuò)增中,添加了一對引物和特異性熒光探針。該探針是線性寡核苷酸,其兩端分別標(biāo)記有熒光報告基團(tuán)和熒光猝滅基團(tuán)。探針完成后,報告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收,無法用PCR儀檢測到。在PCR擴(kuò)增過程中(延伸階段),探針被Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性消化并降解,從而使報告熒光團(tuán)和淬滅熒光團(tuán)分離,從而使熒光監(jiān)測系統(tǒng)能夠接收到熒光。信號,即每個擴(kuò)增的DNA鏈,都有一個熒光分子形成,從而使熒光信號的積累與PCR產(chǎn)物的形成*同步,這是
熒光定量服務(wù)的基礎(chǔ)。那么它服務(wù)的內(nèi)容和要求是什么?
一、服務(wù)內(nèi)容:
1、從動物細(xì)胞,人或動物組織中提取核酸;
2、分析核酸的濃度和純度;
3、熒光定量服務(wù)PCR檢測;
(1)引物和探針的設(shè)計與合成;
(2)定量和相對定量的選擇;
(3)探針法和染料法的選擇;
(4)通過熒光定量PCR檢測目標(biāo)基因;
(5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析;
4、實驗前服務(wù):根據(jù)客戶提供的目標(biāo)基因序列或NCBI序列號提供客戶引物和探針,并選擇引物和探針;
5、正式實驗服務(wù):根據(jù)初步實驗中選擇的引物和探針,通過熒光定量PCR檢測樣品,并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。
二、熒光定量服務(wù)要求:
1、請?zhí)峁┍M可能多的新鮮材料(各種材料的RNA提取量請參考“總RNA提取”),或直接提供純化的總RNA(大于5ug/樣品);(有關(guān)各種材料的DNA提取量,請參閱“DNA提取”),或直接提供純化的DNA(大于5ug/樣品)。
2、請通過電子郵件提供已知的全長基因序列。
3、請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景信息:DNA/RNA來源,豐度等。